1菌种的培养发酵以及提取-1的生产

、1菌种的培养

脱氮假单胞菌和薛氏丙酸杆菌是目前工业应用广的：产生菌，其中丙酸菌是兼性厌氧菌。以薛氏丙酸杆菌发酵生产1：为例，该类菌株采用两阶段发酵法：阶段采用厌氧培养，在厌氧培养阶段，菌体内生成大量咕啉醇酰胺；二阶段采用通气培养，在需氧培养时，此化合物又转变成.：。如在厌氧培养阶段添加5，6-二并咪唑（化学合成），则可省去需氧培养阶段，进而缩短发酵周期。

1.斜面种子培养

取低温保藏的薛氏丙酸杆菌，接种于斜面培养基上，30℃培养4d。

2.种子培养

将斜面培养物以挖块接种的方式，接种到种子摇瓶中，30℃静置培养2d。

3.二种子培养

将种子培养液以3%（体积分数）的接种量接种于灭菌后的种子罐中，于30℃不通气培养24h（用氨水维持pH为6.5）。

4.发酵培养

将生长良好的二种子液以2%（体积分数）的接种量接种于灭菌后的发酵罐中，在不通气、微氮气压力和慢搅拌下30℃培养80h，再于搅拌和低通气的条件下培养88h。

整个发酵过程中需要补糖，并用氨水维持pH为6.5。

二、1：的提取

1.过滤水解

菌体与e结合比较牢固并包埋于菌体内部，通过过滤获得菌体，然后加酸、加热，水解破坏菌体，释放出u.

2.提取

对.的溶解能力比水强，与丁欧混溶形成的混合物与水不互溶，经充分搅拌后，：从水相转入苯-丁醇相并与水被此分层而分离。

3.水提

向苯的-丁醇混合液中加入三氯甲烧后，三者混合，使苯的对.的溶解能力降低而使其在水相中的分配较高，三氯甲烧加得越多，2转入水里越容易。充分搅排混合，使有机相与水相互不相溶面分层分离。

4.我化

的CN能吸附和取代类似1分子中的Fe和其他基团，使之全部转化为氰钻胺素（1u）

5.-三氯甲就提取

与恭酚-丁酵溶剂提取相似，只不过用代替丁醇后改善了有机溶剂对a的选择性溶解。

6.二次水提

丁醇、加入-溶液中，适当提高了溶剂对蛋白质等杂质的溶解程度。

7.酸化

调pH至3.5~4.0，沉淀除去部分酸性不溶物。

8.色语

利用不同物质对三氧化二铝具有不同的吸附能力以达到分分离的目的，从而得到高纯度的z。

9.结品

1：不溶于纯丙闹，但溶于含水丙酮，当向原液（50%含水丙酮）中不断加入纯丙酮时，原液中水的含量相对减少，.的溶解度逐渐降低，直到过饱和状态，降低温度后：不断结晶析出。

三、思考题

1.什么是维生案？根据溶解性质不同，维生素可分为哪两大类？各包括哪些？

2.目前，工业生产维生素的方法有哪几种？请简要说明。

3.简述利用阿氏假囊酵母发辞生产.的工艺流程。在发酵的预处理中加入3-羟基-2-袭甲酸钠的目的是什么？

4.目前，利用微生物发酵法生产的维生素有哪些？

5.根据的结构特点，说明它的生理功能。

6.简述莱氏法发酵生产的工艺流程。

7.我发明的两步发酵法，指的是哪两步？两步反应的底物和产物各是什么？催化第二步反应的微生物是什么？说明两步发酵法生产的优点。

8.在1a的发酵生产中，常采用的菌种有哪几种？

9.简述从、发酵废液中提炼12的工艺流程。

10.用薛氏丙酸杆菌发酵生产1a时，常采用两阶段发酵法，两阶段指的是哪两个阶段？若利用薛氏丙酸杆菌发酵生产a，如何提炼？

项目4核酸类药物发酵技术