任务3糖化酶的分离提取及性质分析

、糖化酶的分离提取

成品糖化酶可分为液体酶和固体酶两种，固体酶的制备方法可分为盐析法、有机溶剂沉淀法和吸附法等，采用条合理的提取工艺，可制备系列酶产品以满足不同行业的需求及降低成品的成本，具体流程如图6-13所示。

发称被硫续沉淀1论游液回收i粉停稳定剂、防腐剂滋件烘干包装包装数食品）烘干、粘碎扬碎《食品哦工业）包装（食品》包装（工业）

图6-13糖化酶固体确提取制备工艺流程

目前内对液体酶产品采用的浓缩方法有两种，种为依靠热源来蒸发产品中的水分，另种为利用渗透膜超滤除去产品中的水分。比较上述两种方法，前者设备投资大、耗能多；而后者投资少、耗能低，且操作简单、清洗方便、维修及更换成本低，产品收率高。

渗透膜超滤浓缩方法中，絮凝工艺是提取工艺中关键的步，直接决定板框过滤等工序的工作与产品的质量，渗透膜超滤浓缩法流程如图6-14所示。

发辞液—絮—板框压键—键液蛇饼超密浓络干燥后作填充剂我饲料防版和标准化处理成品

图6-14渗透膜超湾浓缩制备液体糖化硫工艺流

根根据上述过程可知，糖化酶的分离提取主要有以下几个步骤。

1.酶液的获得与预处理

固态培养：取孢子布满麸曲、酶活力已达高峰的固态基质，用0.9%的生理盐水搅拌浸泡1h，4层纱布过滤，滤液于4℃，6000r/min，离心10min，上清液即为粗酶液。

液态培养：直接取发酵液于4C下离心、洗涤，上清液经纱布过滤，合并后得到粗醉液。

预处理：由于发酵所采用的培养基大多含有麸皮等纤维成分，经初步分离所得的粗酶液中大多含有大量不溶性杂质，因此还需要经过絮凝和压滤的处理，从而大大改善发酵液的过滤性，提高澄清度。应用作为糖化酶絮凝剂的种类主要有APAM（阴离子案丙烯酰胺）、、硅藻土、硫酸锌、黄血盐等，具体加入种类和浓度须经实验确定。精制浓缩液体糖化酶的生产过程中，絮凝工艺是关键的步，如果絮凝效果不好，将导致处理时间长，增加染菌的可能性。

2.碎液的浓缩

经过预处理的粗酶液般糖化酶的浓度较低，不适合工业化需要，需要进步地浓缩。其方法可采用真空浓缩、酒精沉淀、超滤等。前两种方法多用于固体酶制剂的制备，超滤多用于液体制剂的制备。

超滤是加压膜过滤方法的种，其工作原理是在定压力下把大溶质分子阻留在藤的侧（留在原来的溶液中），而小溶质分子透过至膜的另侧，从而达到分离纯化、浓缩产物的目的。超滤法适用于牛物大分子发酵产品（如糖化酶、a-）等的提取纯化和浓缩。该工艺具有成本低、操作方便、条件温和、较好地保持酶活力、产品回收率高等该方法的使用过程中，需要根据产品质量和工艺要求选择超滤膜、进料口压力、出料口压力、进出料口之压差、操作温度（不超过40℃）、浓缩倍数等条件，以达到佳的效果。

运行过程中定时测定超滤液的流及酶活力，以确认超滤器运行是否正常。

同时，李静等（2010）用双水相体系[PEG/KH，PO.、PEG/（NH。）：S0，和PEG/

MgSQ.]萃取糖化酶，其中以PEG/（NH。）：SO.双水相体系在PEG相对分子质量为20000、PEG溶液浓度为28%、（NH。）：SO，溶液浓度为20%时，分配系数为0.15，萃取效果好，即糖化酶回收率高（96.1%）。

3.酶液的千燥与后处理

如果制作固体酶制剂，将获得的浓缩液沉淀、离心后，所得酶泥放入干燥箱中40℃热风干燥，干燥物磨粉后加入防腐剂、稳定剂（如、、醋酸钙等）即得到租酶制剂成品。

而液体醉制剂，只需在浓缩液中加入防腐剂、稳定剂即可。

二、糖化酶的性质分析

1.糖化酶活力测定

具体参考本书相关内容。

2.糖化酶性质

籍化酶相对分子质量：瓣化酶是种组合酶，采用离子交换层析法分离纯化其各种成分（测定有活性的），收集后，经电泳得到其相对分子质量。

适反应温度：将适量经层析纯化的醇制剂溶于定pH的缓冲液中，在不同温度下分别测定糖化酶活力，以高酶活力为，绘出反应温度与酶活力的相关曲线。热稳定性：将适量经层析纯化的酶制剂溶于定pH的缓冲液中，在不同温度下分别保温不同时间后，测定糖化酶活力，以不经保温的酶活力为，绘出保温时间与酶活力的相关曲线。

适pH：将适量经层析纯化的制剂溶于不同pH的缓冲液中，在适温度下分别测定糖化酶活力，以高酶活力为，绘出不同pH与酶活力的相关曲线。

思考题

1.糖化酶的特点有哪些？

2.薪化酶产生菌分离筛选的主要方法流程是怎样的？

3.糖化醇的实际应用有哪些方面？

4.糖化酶的作用特点与纤维素酶有何异同？

5.产糖化酶真菌与产纤维素酶真菌的培养特点有何异同？