一、把下面的物品，按流程加入微量离心管中

1.102-105份DNA模板

2.引物各1 umol/L

3.核苷酸200 umol / L

4.1/10体积的10*PCR缓冲液

5.DdH_2O补充到最终卷(最终卷50-100 ml)

混合后，将反应组分离心15秒，收集在试管底部。以上步骤仅用于实验研究。目前商用试剂有dNTP、10倍PCR缓冲液、引物和ddH_2O混合，反应量为20-25 ugl。只要实验者把加工好的样品加进去就可以了。

在反应液表面加入50-100毫升石蜡油，防止蒸发。反应管在97℃变性10分钟。

当温度低至伸长时，加入1-5u Taq DNA聚合酶，离心30秒，使酶与反应溶液充分混合。试剂酶现在通常添加到反应溶液中供临床使用。

四、PCR仪的循环程序为:94变性30秒，55退火20秒，72延伸30-35个循环。在zui的个循环结束后，将反应管在72℃下孵育5分钟，以确保充分延长。

PCR仪也可用于扩增组织样本中的DNA。

在PCR检测RNA病毒时，首先要将RNA转化为DNA进行扩增，因为PCR只能扩增DNA模板。我们将RNA的PCR反应称为逆转录PCR，简称RT-PCR。把RNA转化成DNA的过程叫做逆转录，这是通过逆转录酶的作用完成的。

PCR仪使用注意事项:

1. PCR仪应放置在一个坚实的水平台上，外部电源系统电压应匹配，并需要良好的接地线。

2. 环境温度和湿度分别维持在23℃和60%左右。

3. 应配备功率大于3000W的稳压器。

4. 定期清洁和保养。5. 使用时应严格遵守以上步骤。