分光光度法是根据物质的吸收光语及光的收收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法，当光照射浴液时，当光子的能量（hv)与被照射物质的基态和激发态能量之差（DE)相等时，就能被吸收，不同物质的基态和激发态的能量之差不等，因此，吸收光子的能量也不同，即吸收光的波长不同，这就是物质对光的选择性吸收。物质选择性的吸收某种颜色的光，则呈现的是照收光的互补色。以入射光的波长（l）为横坐标，溶液的吸光度（A）为纵坐标画出的曲线，即吸收光谱，吸收光语中吸光度的波长，为吸收波长，用/ms表示。
分光光度法测定物质含量的依据是Lambert-Beer定律（朗伯-比尔定律），即A=Kbc
式中，A为溶液的吸光度：c为溶液的浓度；b为液层厚度。
定量测定时，常用的定量方法有标准曲线法、标准对照法、比吸光系数比较法以及差示分光光度法。它们各有其适用的范围。由于许多物质在可见光区无特征吸收，而在近紫外(200~400nm)处有特征吸收，故需用紫外光为光源进行测定。
