*次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量无水乙醇! 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X. 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇.此裂解液现用现配.配好的RLT 4℃可放置一个月.1. 在适合大小的RNase free离心管中加入1体积（<1.5 ml）加入各种抗凝剂新鲜血液="" （颠倒混匀后）和3体积的红细胞裂解液rlb,颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀.2.="" 室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）.="" 如果rna降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解.3.="" 12,000="" rpm离心20秒,倒弃红色上清,并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要吸到管底的细胞团）,留下完整的管底白细胞团.="" 离心后在管底应该见到白色的白细胞团,也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起,但是如果看到的是大部分的红色细胞团,说明红细胞裂解很不充分,应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤2,3.="" 上清尽可能的吸弃,残留过多会稀释裂解液,造成裂解结合异常,产量纯度降低.4.=""><0.5><2x106白细胞）或者600μl（2x106-1x107白细胞）比例加rtl.5. 用带钝针头的一次性="" 1="" ml（配0.9mm针头）="" 注射器抽打裂解物="" 5-10="" 次或直到得到满意匀浆结果（或者电动匀浆30秒）,可以剪切dna,降低粘稠度和提高产量.6.="" 较估计裂解物体积,加入等体积的70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!）,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心.7.="" 立刻将混合物（每次小于700μl,多可以分两次加入）加入一个吸附柱ra中,（吸附柱放入收集管中）13,000="" rpm离心60秒,弃掉废液.8.="" 加700μl="" 去蛋白液rw1,室温放置30秒,12,000rpm="" 离心30秒,弃掉废液.="" 如果dna残留明显,可在加入rw1后室温放置5分钟再离心.9.="" 加入500μl漂洗液rw（请先检查是否已加入无水乙醇!）,12,000="" rpm="" 离心30秒,弃掉废液.加入500μl漂洗液rw,重复一遍.10.="" 将吸附柱ra放回空收集管中,13,000="" rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,="" 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应.11.="" 取出吸附柱ra,放入一个rnase="" free离心管中,根据预期rna产量在吸附膜的中间部位加30-50μl="" rnase="" free="" water（事先在="" 70-80℃水浴中加热效果更好）,="" 室温放置1分钟,12,000="" rpm="" 离心1分钟.12.="" 如果提取全血="">0.5 ml或者>2x106白细胞,加30-50μl RNase free water重复步骤11,合并两次洗脱液,或者使用*次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍（如果需要RNA浓度高）. 洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择.