建筑密封材料试验方法

第25部分：耐霉菌性的测定

1  范围

本文件描述了建筑密封胶耐霉菌性测定方法的试验原理、试验条件、试验器具和材料、培养基和试剂、试件准备、试验程序、结果评定以及试验报告。

本文件适用于建筑和土木工程用密封胶耐霉菌性的测定，其他密封材料或接缝材料耐霉菌性的测定参考本文件。

2  规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。

GB/T    6682—2008   分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19258.1—2022        杀菌用紫外辐射源  第1部分：低气压汞蒸气放电灯

YY 0569    

3  术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

 建筑密封胶  building  sealant

 以非成型状态嵌入建筑和土木工程接缝中，通过与接缝表面粘结而使接缝密封的材料。 

 [来源：GB/T       14682—2006,2.1.3,有修改]

3.2

         霉菌  mold

丝状真菌，通常指菌丝体较发达又不产生肉质子实体结构的真菌。

注：霉菌菌体由营养菌丝和气生菌丝构成，部分气生菌丝发育到一定阶段，分化为繁殖菌丝，产生霉菌孢子。 

[来源：GB/T       35469—2017,3.1,有修改]

3.3 

   耐霉菌性  resistance to mold

耐受或阻止、抑制霉菌孢子及菌丝体的生长与繁殖的能力。 

[来源：GB/T      1741—2020,3.1]

4  试验原理

通过在培养基表面接种和涂布霉菌孢子液，并将经过规定的养护和杀菌处理作用后的试件放置于霉菌孢子液上，在适合霉菌生长的环境下进行培养，培养结束后观察霉菌在试件表面的生长情况，根据试件表面长霉面积对其耐霉菌性进行评定分级。

5  试验条件

试验条件为：温度(23±2)℃,相对湿度(50±5)% 。密封胶样品应在此条件下放置至少24h 后进行试验 。

6  试验器具和材料

6.1 试验器具

6.1.1 高压蒸汽灭菌锅：控温范围为101℃~137℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±2℃。

6.1.2        型框：不锈钢或其他不影响密封胶性能的材质，内部尺寸宜为(100±10)mm×(200±10)mm×(2±0.2)mm。

6.1.3       刮涂工具：尺寸宜为150 mm×70mm×1mm的铝质或其他不影响密封胶性能材质的刮板。

6.1.4        紫外灯：符合GB/T 19258.1—2022的要求，波长253.7 nm 。紫外线辐射通量30W, 紫外辐照 强度不低于70μW/cm²。

6.1.5        生物安全柜：符合YY 0569的要求。

6.1.6  接种环。

6.1.7  生化培养箱：控温范围为5℃~50℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃。

6.1.8  冰箱：控温范围为4℃~10℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±2℃。

6.1.9         培养皿：Φ90 mm。

6.1.10 恒温恒湿培养箱：控温范围为10℃~50℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃;相对湿度范围为50%～95%,精度为5%。

6.1.11  浸泡箱：容量不少于1.2L的玻璃或其他不影响密封胶性能的耐热材料制成的容器，具有密封性。

6.1.12  电热鼓风干燥箱：控温范围为30℃~100℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃。

6.1.13  恒温水浴锅：控温范围为40℃~60℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃。

6.1.14  显微镜：放大倍数50倍。

6.1.15       电子天平：精度为10mg, 量程为0 g~2200g;     精度为1mg, 量程为0 g~200g。

6.1.16        pH 计：分度值0.01,量程为0.00~14.00。

6.1.17         无色玻璃试管(具塞):规格18 mm×180     mm。

6.1.18 霉菌生长面积识别设备：基于视觉识别或其他技术原理对试件表面长霉面积进行统计计算并评级的设备。

6.2  试验材料

6.2.1 基材：宜采用光泽(60°)不大于10.0,反射率不大于4.0%的黑色聚烯烃塑料片，尺寸为432  mm×165mm×(0.25±0.02)mm。

6.2.2 定性滤纸。

6.2.3    玻璃珠：粒径3mm~7mm。 

7  培养基和试剂

7.1  一般要求

除另有规定外，所有试验均使用化学纯或化学纯以上的试剂和符合GB/T 6682—2008中三级水要求的蒸馏水或去离子水。

7.2  无菌水

将含有0.005%分散剂(如吐温80)的水，放入高压蒸汽灭菌锅(6.1.1)于(121±2)℃灭菌20min。

7.3 营养盐溶液

见附录 A 中 A.1。

7.4  营养盐琼脂培养基

见 A.2。

7.5   马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA) 培养基

见 A.3。

8  试件准备

8.1  试件制备和养护

分别制备3个试件用于耐霉菌性和浸50℃水后耐霉菌性的测试，试件制备数量和尺寸见表1。将型框(6.1.2)置于基材(6.2.1)上，如图1所示。将试样直接挤出于型框中，使用刮涂工具(6.1.3)刮至表面平整，避免形成气泡。在试验条件(见第5章)下养护7d 。养护完成后，脱模并裁切至表1规定的试件尺寸。

表 1 试件制备数量和尺寸

单位为毫米

标引序号说明：

1 — — 型框；

2 — — 基材。

图 1 试件制备示意图

8.2 试件杀菌处理

试验前，使用紫外灯(6.1.4)对试件两面分别照射20 min 进行杀菌处理。

8.3 空白对照样品

用3张定性滤纸(6.2.2)分别裁切为(40±2)mm×(40±2)mm        作为空白对照样品。

9  试验程序

9.1  一般要求

试验所用的器具和材料(6.1.6、6.1.9、6.1.18、6.2.2、6.2.3)应置于高压蒸汽灭菌锅(6.1.1)于(121± 2)℃灭菌20 min。

9.2 混合霉菌孢子液的制备

9.2.1  试验菌种

试验所用菌种应来自中国普通微生物菌种保藏管理中心(见表2)或其他菌种保藏管理中 心，并在试验报告中注明菌株号。经有关方商定后，也可增加其他试验菌种并在试验报告中说明。试 验菌株传代次数在标准菌株的5代以内。

表2  试验菌种

9.2.2  菌种培养及保藏

将9.2.1中的各个菌种在生物安全柜(6.1.5)内用接种环(6.1.6)分别接种于马铃薯-葡萄糖琼脂 (PDA)  培养基(7.5)上，每接种完一个菌种，应对生物安全柜(6.1.5)消毒后才能继续接种。接种后的菌 种于(28±2)℃条件下在生化培养箱(6.1.7)内培养7 d~14d     使斜面长满霉菌孢子，培养结束后置于4 ℃~10℃条件下保藏，时间不超过3个月。

9.2.3  混合霉菌孢子液的制备

在生物安全柜(6.1.5)内用接种环(6.1.6)挑取霉菌孢子(9.2.2),接种于马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA)   培养基(7.5)斜面上，于(28±2)℃条件下在生化培养箱(6.1.7)内培养7 d~14d,    当培养基表面长满霉菌 后，向培养基加入10mL 无菌水(7.2),在生物安全柜(6.1.5)内用接种环(6.1.6)在无菌操作条件下轻轻地刮下霉菌培养物表面的孢子，得到霉菌孢子悬浮液。每支马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA)  培养基(7.5)斜面只能制备1次悬浮液。

将霉菌孢子悬浮液倒入预先装有45mL 无菌水(7.2)及10~15个玻璃珠(6.2.3)的三角瓶中，用力 振荡三角瓶以打散孢子团并使霉菌孢子从子实体中释放出来。使用叠放定性滤纸(6.2.2)的玻璃漏斗 或双层纱布置于三角瓶上，将充分振荡后的霉菌孢子悬浮液过滤，除去菌丝和培养基碎片。

用无菌营养盐溶液(7.3)稀释霉菌孢子滤液，制成浓度为0.8×106个/mL~1.2×106 个/mL 的霉菌 孢子液，用血球计数板或其他方法测定霉菌孢子浓度。单个霉菌孢子液在4℃~10℃下冰箱(6.1.8)中 储存不超过4d。将霉菌孢子液等体积混合，获得混合孢子液，制备好的混合孢子液应当天使用。

9.3  接种培养

9.3.1  耐霉菌性测定的接种培养  

向6个培养皿(6.1.9)中分别倒入20 mL~25mL    营养盐琼脂培养基(7.4),待培养基凝固后，向每个培养基表面加入0.4 mL 的混合霉菌孢子液(9.2.3)并使用涂布棒将其涂抹均匀。再将3个试件和 3个空白对照样品分别放置在6块培养基表面，并对3个试件进行拍照。

将6个培养皿同时放置在温度(28±2)℃、相对湿度不低于90%的恒温恒湿培养箱(6.1.10)内进行培养。在培养满7d 时检查空白对照样品上霉菌生长情况，3个空白对照样品都应有霉菌生长，否则本次试验无效，应重新进行试验。若每个空白对照样品上均可见霉菌生长，继续培养满28d 时，立即对其上表面进行观察并拍照。可以商定延长试验时间，并在试验报告中说明。

9.3.2  浸50℃水后耐霉菌性测定的接种培养

试验前应检查浸泡箱(6.1.11)洁净无污染。将3个试件放置于含有1L 水的浸泡箱中，试件应被水浸没，不可叠放。将浸泡箱放置于(50±2)℃的电热鼓风干燥箱(6.1.12)或恒温水浴锅(6.1.13)等 其他可满足温度要求的器具内。浸泡时间为14d, 满 7d 时更换一次水。不同试样制备的试件应放置 于不同浸泡箱内，不能混放。浸泡结束后，将试件取出在试验条件(见第5章)下放置24h 后按9.3.1 规定进行接种培养。

10  结果评定

10.1  方法1(目视检查法)

接种培养(见9.3)结束后，将培养皿从恒温恒湿培养箱(6.1.10)取出，在生物安全柜(6.1.5)中目视 观察3个平行试件上表面的长霉面积。

10.2  方法2(图像识别法)

图像识别法应按照附录B 的规定进行。

10.3  等级评定

耐霉菌性等级或浸50℃水后耐霉菌性等级按表3进行评定。若长霉面积占比小于10%,应用显  微镜(6.1.14)放大50倍进行观察。最终结果应以2个或2个以上平行试件的相同耐霉菌性等级为准， 若任意2个平行试件的耐霉菌性等级相差2级或2级以上时应重新进行试验。

表 3  耐霉菌性等级/浸50℃水后耐霉菌性等级

11  试验报告

试验报告应至少包括以下内容：

a)     本文件编号；

b)     样品名称、类别(化学种类)、颜色和批号；

c)     试件的尺寸；

d)     试验日期；

e)     菌种名称、菌株号；

f)     制样和养护时间；

g)     试件培养条件(温度、相对湿度和时间);

h)    结果评定方式(方法1、方法2);

i)     如用显微镜进行观察，应注明显微镜放大倍数；

j)     耐霉菌性等级或浸50℃水后耐霉菌性等级；

k)     测试前后试件照片；

1)  与本文件的任何偏离；

m)   报告人和审核人。