果汁中乳酸、柠檬酸、富马酸含量检测高效液相色谱法
参照SNT 2007-2007本标准规定了果汁中乳酸、柠檬酸、富马酸含量的高效液相色谱检测方法，适用于苹果汁、梨汁中乳酸、柠檬酸、富马酸含量的测定。
果汁试样直接用水稀释，用配有紫外（UV）检测器或二极管阵列（PDA）检测器的高效液相色谱仪，外标法定量。
磷酸二氢铵；磷酸；柠檬酸标准品：纯度大于等于95.5%；富马酸标准品：纯度大于等于95.5%
乳酸标准储备液：在制备和标定
柠檬酸标准储备液：准确称取适量柠檬酸标准品，用水溶解并配置成浓度为10.0mg/mL的标准储备液，于4℃保存
富马酸标准储备液：准确称取适量富马酸标准品，用水溶解并配置成浓度为10.0mg/mL的标准储备液，于4℃保存
混合标准储备液：取25ml乳酸标准溶液，25ml柠檬酸标准溶液和2.5ml富马酸标准溶液于100ml容量瓶中，用水稀释到刻度，此溶液标准储备溶液。根据需要将混合标准储备溶液稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，于4℃保存
仪器和设备
501高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器或紫外检测器
PH计
阿贝折光计
取有代表性样品500g，混合均匀，装入洁净容器内，密闭并标明标记，4℃保存。
称取浓缩果汁试样越5g（精确到0.0001g）于50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过0.45m滤膜后作为样液，供HPLC测定
色谱柱：Inertsil ODS-3柱（250mm×4.6,5um）或者与之相当的色谱柱
流动相：0.1mol/l磷酸二氢铵溶液，用磷酸调节PH=2.4，过0.45m滤膜
流速：0.6mL/min
检测波长：210nm
色谱柱温度：40℃ RPL
进样体积：10uL
色谱测定
根据样液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对于标准工作溶液与样液等体积参插进样测定，标准工作溶液和待测样液乳酸、柠檬酸、富马酸的响应值应在仪器检测的线范围内。在上述色谱条件下，乳酸、柠檬酸和富马酸的保留时间分别约为9.0min、11.8min、13.6min。
计算
用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中的被测物的含量，计算结果徐扣除空白值
X=A×Cs×V/As×m
X-试样中被测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）
A-试样中被测物的色谱峰面积
Cs-标准工作液中被测物的浓度，单位为毫克每毫升（ug/mL）
V-样液最终定容体积，单位为毫升（mL）
As-标准工作液被测物的色谱峰面积
m-最终样液所代表的试样量，单位为克（g）
在规定的可溶性固形物为B时的被测物的含量按式（2）计算：x=B×X/Bo
x-可溶性固形物为B时的被测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）
B-规定的可溶性固形物含量，Brix
X-试样中被测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）
Bo-试样的可溶性固形物含量，Brix
测定限
本方法对乳酸、柠檬酸和富马酸的测定低限分别为0.25g/kg，0.25g/kg和0.25mg/kg，
回收率
在浓缩苹果汁和浓缩梨汁中乳酸、柠檬酸、富马酸的添加浓度及其回收率实验数据见下列
乳酸：在添加浓度为（0.25g/kg，0.5g/kg，5.0g/kg）时回收率范围为%（93.0-105.0,96.5-103.9,98.7-101.8）
柠檬酸：在添加浓度为（0.25g/kg，0.5g/kg，5.0g/kg）时回收率范围为%（91.2-104.0,92.6-102.3,97.9-101.5）
富马酸：在添加浓度为（2.5mg/kg，5.0mg/kg，500mg/kg）时回收率范围为%（94.8-104.0,96.8-102.4,96.6-102.3）
乳酸标准储备液的制备和标定
乳酸：纯度约为90%
0.1mol/L标准滴定溶液：按GB/T 601配置和标定
仪器和设备：电热套：500ml
圆底烧瓶：500ml
球形冷凝管：400mm
称取乳酸约3.0g于500ml圆底烧瓶中，加270ml水，装上球形冷凝管，接通冷却水，加热回流15h，冷却至室温后，移取20ml溶液，用0.1mol/L标准滴定溶液按GB/T 12456规定方法标定仪器 设备购买：
501耐高压恒流 1台
501可变波长紫外可见检测器 1台
AP-01真空泵 1台
手动进样阀 1支
100ul进样针 1支
Inertsil ODS-3柱（250mm×4.6,5um） 1支
色谱工作站软件 1套
色谱柱温箱 1台
超声波清洗器 1台
溶剂过滤器 1套
