二手高效液相色谱仪是通过将混合物的组分溶解、分配或吸附在固定相和流动相中的不同而使组分在相对运动过程中多次受到上述各力的作用，从而达到相互分离的目的。HPLC广泛应用于食品分析，环境分析，生命科学，医学检验，无机分析。一般情况下，80%-85%的有机物可以采用二手HPLC。
1、输液系统
包括溶剂柜、真空脱气机、溶剂混合器、高压泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足够的驱动力使流动相通过填充紧密的色谱柱。
洗脱方式也分为两种：
（1）等度洗脱：在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。
（2）梯度洗脱：采用两种（或多种）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相的浓度配比和极性的一种洗脱模式。用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。
2、进样系统
把分析试样有效地送入色谱柱进行分离。一般有自动进样器和手动进样器，进样量应不小于定量环体积的5-10倍（最少3倍）。
3、分离系统
主要是色谱柱，色谱柱是一根装满填料的管子。色谱柱的材料有不锈钢、塑料、玻璃等，其尺寸（内径、长短）不尽相同；色谱柱填料主要有硅胶基质和聚合物基质，填料的粒径不尽相同。
4、检测器
对检测器的要求：灵敏度高、重现性好、线性范围宽、死体积小、对温度及流量的变化不敏感等。主要有紫外检测器、荧光检测器、示差检测器等。
