显微镜使用之细胞测量
应用显微镜的成像原理,同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺,两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小。
镜台测微尺是部分刻有精确等分线的载玻片。一般将lmm等分为100格(或2mm等分为200格),每格长度等于0.01 mm(即105m)。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片,其刻有精确的刻度,有等分50小格或100小格两种,每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同,目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同,因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小,在使用前必须用镜台测微尺进行校正,以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值,然后才可用来测量微生物的大小。
1.目镜测微尺的标定
(1)放置目镜测微尺取出接目镜,旋开接目镜透镜,将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上,然后旋上接目透镜,最后将此接目镜插人镜筒内。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上,使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察,对准焦距,当看清镜台测微尺后,转动接目镜,使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线重合,然后计数出两对重合线之间各自所占的格数。
2.鸭血细胞大小的测定
(1)将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴数滴瑞氏一吉姆萨染液欲涂片上,静置染色1分钟,滴加等量1/15moUL磷酸缓冲液,用牙签轻轻搅拌混匀,再静置染色5-10分钟,最后用清水缓缓冲洗I分钟,倾斜放置,晾干后进行观察测量。
(2)目镜测微尺校正后,移去镜台测微尺,换上鸭血涂片,校正焦距使细胞清晰,转动目镜测微尺(或转动染色标本),测出鸭血细胞的长和宽各占几小格,将测得的格数乘以目镜测微尺每小格所代表的长度,即可换算出此单个细胞的大小值。
在测量时应注意将被测量的标本移放到视野中心,因为在这个位置上镜像最清晰,像差也最小,为减少误差,在测量同一被检物时,要量3次以上,采用其平均值,还要注意视野中的亮度应均匀一致,以免标尺分度左右两侧的亮度不同而影响准确测量值的得出。
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