显微镜切片的制作
对光学显微镜进行分类的方法有很多种,比如金相显微镜,生物显微镜,体视显微镜,荧光显微镜,按品牌分类有尼康显微镜,奥林巴斯显微镜,徕卡显微镜等等。其次根据显微镜价格来分类有可以分为从低到高很多个档次。但是今天我们用另一种分类方法,将常规的显微镜分为两种,观察切片的显微镜和观察实体的显微镜,在使用生物显微镜时,首先要作的就是制作切片,本文针对切片制作详细讲解。
在医学上切片应称作组织切片或病理切片。将手术取下来的病理组织或可疑的组织固定、封腊,经过切片机切成组织薄片,然后固定在玻片面上,进行染色,这就是切片。最后将制作好的切片放在显微镜下观察,根据其病理细胞的特征,进行病理学的组织定性。显微镜的文章可以在本网站找到。很多材料比较疏松的就做成涂片,致密一些的一般就做切片,只用少量材料或者材料比较小的应该做装片。
不同医学要求或者切除对象组织结构不同, 导致切片的类型也不一致,在奥林巴斯CX21上见的是石蜡切片,制作简单而且方便。显微镜除了石蜡切片之外,显微镜在制作较大结构(如眼球、睾丸等)的切片时,常用火棉胶包埋法;骨和牙等坚硬的组织,可用弱酸(稀硝酸)脱钙后,用石蜡或火棉胶切片法制成切片标本。另外,为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要,可选用冷冻切片,显微镜它是将组织先在低温下快速冻结,经直接切片后进行染色,或将组织块置入液氮(-196℃)内快速冷冻,用恒冷箱切片后进行染色。
显微镜切片的制作方法,本文以石蜡切片为例简单介绍切片的制作方法。
取材和固定,动物切片取材时, 由于动物组织结构自身的霉会使动物死后或者离体后的组织迅速分解,所以,显微镜被取材的动物在麻醉下或以不同方法处死后,迅速切成适当的小块(1.0 立方厘米大小)立即投入固定剂(fixative)中进行固定,使组织中蛋白质迅速凝固,防止组织自溶或,以保持生活状态下的结构,以免对后期观察造成过大误差影响。植物切片取材时,应选择组织结构特征明显的部位切取。常用的固定液有Susa 液、甲醛、Bouin 液、酒精、醋酸、等。
脱水、透明、浸蜡、包埋这几个步骤主要是为了将组织包埋在较硬的物质即石蜡中,以便于制备薄的切片。显微镜普通固定液多为水溶液,所以脱水液可选择不同浓度的酒精。组织经过取材固定后,一般经由70%,80%,90%,95%,以至的脱水程序, 各级浓度酒精内处理的最短时间分别为2~4 小时即可达到脱水的要求。因为石蜡不溶于酒精而溶于二甲苯,因而组织块经脱水后须再用二甲苯替代出酒精。显微镜组织块浸入二甲苯后逐渐变得透明,故此步骤称为透明。
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